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分光光度计的操作要点在线视频

下一节:分光光度计的操作要点

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分光光度计的操作要点课程教案、知识点、字幕

我们在前面的课程中已经学过了

分光光度计

的基本原理和使用流程

在实际的使用过程中

还有几个环节需要提醒各位同学

首先分光光度计在使用之前

要预热20~30分钟

预热时间不足会导致仪器读数显示不稳定

但是因为光源灯都有一定的寿命

所以要计算好测定的时间

再开机预热

在实验期间

如果需要关闭光源

则需要等待光源彻底冷却后才能再次开灯

所以一定要安排好你的实验

进程和仪器的使用

第二点

放置分光光度计的台面上

不能有震动 气流 磁场或者强光照射

否则都会导致你的仪器读数显示不稳定

在实际使用过程中

同学们容易在以下几个环节出错

应该给予特别的注意

第一

有同学在实验过程中会忘记调节波长

波长的错误会导致所有的

测定数据都无法使用

所以一定要特别记住

所有测定的第一步一定要确认波长

第二

同学们在手持比色杯的时候

不小心就会接触到光面

这会导致比色杯光面沾染手指上的蛋白

油脂等污渍

影响测定的准确性

第三

样品液倒入比色杯后没有检查杯壁

有的同学把比色杯放入样品池测定后

会发现读数一直在改变

有时因为杯壁外面沾有液滴

液滴的流动带来一层厚度的微小变化

从而导致读数的变化

实际操作中应该再把样品液倒入比色杯后

手持比色杯的毛玻璃面

迎着光观察

如果光面出现了污渍或者

液滴需要用滤纸吸去液体

然后再用擦镜纸认真地擦拭干净

之后再进行测定

第四点

测定时可能会遇到某一个数值突然增大

这很可能是因为误将比色杯的毛玻璃面

置于光路上

导致吸光度大幅增加

实际操作的过程中

一定要先阅读说明书或者

观察清楚光路的方向

确保光线通过的是比色杯的光面

第五

标准曲线斜率线性不好

或者在几个平行样之间的样品极差比较大

这种情况往往是因为同学在实验中

每台仪器一般会配备3~4个比色杯

需要在测定的过程中循环使用

如果润洗操作不到位

残留的待测物就会影响后续样品的测定

因此

在比色杯的润洗过程中

请务必注意

每次倒掉液体后都要用吸水纸

把杯口多余的液体吸净

但是千万不能把纸伸入到比色杯内部擦拭

以免留下纸屑影响后续的测定

把多余的液体吸完了之后

再用待测液润洗四面杯壁

润洗2~3次之后再加入待测液

那说到润洗

大家还要注意

你的待测液总液体量是多少

对于学生实验常用的分光光度计来说

一般使用的是一厘米直径的比色杯

而分光光度计的光路一般在

比色杯高度将近一半的位置

因此说每只比色杯中至少要装入

3~4毫升以上的液体

才不会影响测定

具体体积还要因仪器光路的高度稍有差异

一般来说

测定时液体的高度要在比色杯

的2/3~3/4比较合适

所以提醒大家

润洗的时候要特别注意用量

以免把比色杯洗得很干净

但是最后剩余液体不够测定了

在测定的过程中

每次打开样品池盖更换样品

都可能导致仪器的读数有所偏移

所以就需要将空白管一直保留在仪器内

每一次测定样品前均需要确认

空白管的透光率T=100%

然后再测定其他样品的吸光度值

分光光度计是生物化学实验中一般用于

标准曲线法测定待测物浓度的仪器

为了尽量降低待测物测定的误差

一般会对待测物设置平行样

也就是说同一个待测物按照相同

的操作步骤做多个样品

然后在完全相同的条件下进行同步分析

为了尽量减少样品间的误差

要将平行样在同一批次进行测定

总结来说

在分光光度计的使用过程中

请同学们注意以下几个细节

第一 千万不要忘记调节

和检查仪器的波长

第二

一定要手持比色杯的磨砂面

严禁手持光面

第三

加入液体后检查杯壁清洁

再放入分光光度计

第四

注意光路的方向

让比色杯的光面

置于光路上

第五

要注意润洗的操作

尽量去除残余液体的影响

第六

注意润洗液体的用量

以免剩余的液体不够测定

第七

每一轮测定都要用空白管调节透光率

第八

平行样要尽量在同一批次进行测定

在实际的实验操作过程中

请同学们注意将操作细节和我们之前

讲过的仪器测定原理相互印证

深刻理解其中的道理和操作的必要性

将操作的细节逐渐变成个人的操作习惯

才能确保所有测定的准确性

基础生物化学实验课程列表:

第一章 课前须知

-第一节 基础生物化学实验学什么?

--《生物化学实验》学什么?

--《生物化学实验》学什么?

-第二节 本课程评分标准

--本课程评分标准

-第三节 如何更好的完成本课程的学习?

--不同需求的同学如何学习本课程?

--不同需求的同学如何学习本课程?

-第四节 生化实验室安全注意事项

--生化实验室安全注意事项

--生物化学实验室安全注意事项

-第五节 本课程教学团队介绍

--本课程团队介绍

--本课程教学团队介绍

-第六节 课前须知作业

--我对本课程的了解和疑惑

-第一章 课前须知 作业

第二章 生命科学三大必备仪器的使用

-第一节 移液器的设计原理和使用规范

--移液器的设计原理和使用规范

--移液器的设计原理和使用规范

-第二节 移液器的操作要点

--移液器的操作要点

--移液器的操作要点

--正向移液和反向移液

--正向移液和反向移液

--移液器的日常校准

--移液器的日常校准

--移液器的操作中易错点

--移液器操作中的易错点

--Eppendorf移液器操作手册

-第二章 移液器的使用 作业

--第二章 移液器的使用 作业

--请用思维导图或表格的形式列举移液器的使用要点

-第三节 分光光度计的设计原理和使用规范

--分光光度计的设计原理和使用规范

--分光光度计的设计原理和使用规范

-第四节 分光光度计的操作要点

--不同分光光度计的设计和操作差异

--不同分光光度计的设计和操作差异

--分光光度计的操作要点

--分光光度计的操作要点

-第五节 分光光度法测定待测物浓度

--分光光度法的原理

--分光光度法的原理

--分光光度法测定物质浓度的实验设计

--分光光度法测定物质浓度的实验设计

-第六节 荧光分光光度计的原理和使用规范

--荧光分光光度计的原理和使用规范

--荧光分光光度计的设计原理和使用规范

-第二章 分光光度计的使用 作业

--第二章 分光光度计的使用 作业

-第七节 离心机的设计原理和使用规范

--离心机的设计原理和使用规范

--离心机的设计原理和使用规范

--离心机的操作要点

--离心机的操作要点

-第二章 离心机的使用 作业

--第二章 离心机的使用 作业

-如何养成规范使用仪器设备的好习惯

第三章 物质的定量测定

-第一节 蛋白质的定量测定

--学习蛋白质定量测定的意义

--学习蛋白质定量测定的意义

--紫外法测定蛋白质浓度的实验原理

--紫外法测定蛋白质浓度的实验原理

--紫外法测定蛋白质的浓度的实验指导

--紫外法测定蛋白质浓度的操作方法

--紫外法测定蛋白质浓度的操作方法

--紫外法测定蛋白质浓度的实验数据计算

--紫外法测定蛋白质浓度的实验数据计算

--双缩脲法测定蛋白质浓度的实验原理和操作方法

--双缩脲法测定蛋白质的浓度的实验原理

--双缩脲法测定蛋白质浓度的实验指导

--双缩脲法测定蛋白质浓度的实验数据计算

--双缩脲法测定蛋白质浓度的实验数据计算

--Lowry法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--Lowry法测定蛋白质浓度的实验原理和操作方法

--Lowry法测定蛋白质的浓度的实验指导

--Bradford法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--Bradford法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--Bradford法测定蛋白质浓度的实验指导

--BCA法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--BCA法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--BCA法测定蛋白质浓度的实验指导

-第三节 其他物质的测定

--核黄素荧光光度定量测定法

--核黄素(VB2)荧光光度定量测定法

-第三章 物质的定量测定 作业

--第三章 物质的定量测定 作业

-你现在能独立设计一个生物分子的定量测定实验吗?

第四章 酶活力的测定

-第一节 酶活力测定的常用方法

--酶活力测定的常用方法

--酶活力测定的常用方法

-第二节 菠萝蛋白酶活力的测定

--菠萝蛋白酶活力测定的原理和操作(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶活力测定的原理和操作

--菠萝蛋白酶比活力的测定(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶比活力的测定(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶比活力测定的实验指导(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶活力的计算(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶活力的计算(Folin酚法)

-第三节 酶米氏常数的测定

--淀粉酶米氏常数的测定和计算

--淀粉酶米氏常数的测定和计算

--淀粉酶米氏常数测定的实验指导

--菠萝蛋白酶米氏常数测定的原理和操作(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶米氏常数测定的原理和操作(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶米氏常数测定的实验指导(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶米氏常数的计算(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶米氏常数的计算(Folin酚法)

-第四章 酶活力的测定 作业

--第四章 酶活力的测定 作业

-查阅一个你感兴趣的酶,想想怎么测?

第五章 物质的分离纯化

-第一节 蛋白质分离纯化的常见技术

--基因工程生产人血清白蛋白之路

--基因工程生产人血清白蛋白之路

--蛋白质分离的一般原则和基本步骤

--蛋白质分离的一般原则和基本步骤

--蛋白质的盐析提纯

--蛋白质的盐析提纯

--盐析操作注意事项

--盐析操作注意事项

--蛋白质的有机溶剂和等电点沉淀

--蛋白质的有机溶剂和等电点沉淀

--离子交换层析

--离子交换层析

--亲和层析

--亲和层析

--蛋白质的超速离心、透析和超滤

--蛋白质的超速离心、透析和超滤

--凝胶过滤层析的原理及凝胶颗粒选择

--凝胶过滤层析的原理及凝胶颗粒选择

--凝胶过滤层析的操作过程和注意事项

--凝胶过滤层析的操作过程和注意事项

--IMAC亲和层析

--IMAC亲和层析

--IMAC亲和层析技术的基本步骤

--IMAC亲和层析技术的基本步骤

--第五章 第一节 蛋白质的分离纯化 作业

-第二节 核酸的提取和检测

--核酸的制备原理及基本步骤

--核酸的制备原理及基本步骤

--质粒DNA的提取制备

--质粒DNA的提取制备

--拟南芥叶片基因组DNA提取

--拟南芥叶片基因组DNA提取

--紫外分光光度法测定核酸

--紫外分光光度法测定核酸

--第五章 第二节 核酸的提取 作业

-你想得到什么分子,如何纯化呢?

第六章 利用电泳对生物大分子进行检测

-第一节 核酸琼脂糖凝胶电泳

--核酸琼脂糖凝胶电泳的原理

--核酸琼脂糖凝胶电泳的原理

--核酸琼脂糖凝胶电泳的染色及结果分析

--核酸琼脂糖凝胶电泳的染色及结果分析

--核酸琼脂糖电泳-作业

-第二节 聚丙烯酰胺凝胶电泳

--SDS-PAGE电泳的原理

--SDS-PAGE电泳的原理

--SDS-PAGE电泳凝胶的染色

--SDS-PAGE电泳凝胶的染色

--利用SDS-PAGE计算蛋白质的分子质量

--利用SDS-PAGE计算蛋白质的分子质量

--聚丙烯酰胺凝胶的聚合原理及相关特性

--聚丙烯酰胺凝胶的聚合原理及相关特性

--SDS-PAGE的原理和操作-作业

-除了电泳,还有什么用于生物大分子鉴定的方法?

第七章 期末考试

-《基础生物化学实验》期末考试

-请留下你对本课程的宝贵建议

分光光度计的操作要点笔记与讨论

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