当前课程知识点:基础生物化学实验 > 第二章 生命科学三大必备仪器的使用 > 第四节 分光光度计的操作要点 > 分光光度计的操作要点
我们在前面的课程中已经学过了
分光光度计
的基本原理和使用流程
在实际的使用过程中
还有几个环节需要提醒各位同学
首先分光光度计在使用之前
要预热20~30分钟
预热时间不足会导致仪器读数显示不稳定
但是因为光源灯都有一定的寿命
所以要计算好测定的时间
再开机预热
在实验期间
如果需要关闭光源
则需要等待光源彻底冷却后才能再次开灯
所以一定要安排好你的实验
进程和仪器的使用
第二点
放置分光光度计的台面上
不能有震动 气流 磁场或者强光照射
否则都会导致你的仪器读数显示不稳定
在实际使用过程中
同学们容易在以下几个环节出错
应该给予特别的注意
第一
有同学在实验过程中会忘记调节波长
波长的错误会导致所有的
测定数据都无法使用
所以一定要特别记住
所有测定的第一步一定要确认波长
第二
同学们在手持比色杯的时候
不小心就会接触到光面
这会导致比色杯光面沾染手指上的蛋白
油脂等污渍
影响测定的准确性
第三
样品液倒入比色杯后没有检查杯壁
有的同学把比色杯放入样品池测定后
会发现读数一直在改变
有时因为杯壁外面沾有液滴
液滴的流动带来一层厚度的微小变化
从而导致读数的变化
实际操作中应该再把样品液倒入比色杯后
手持比色杯的毛玻璃面
迎着光观察
如果光面出现了污渍或者
液滴需要用滤纸吸去液体
然后再用擦镜纸认真地擦拭干净
之后再进行测定
第四点
测定时可能会遇到某一个数值突然增大
这很可能是因为误将比色杯的毛玻璃面
置于光路上
导致吸光度大幅增加
实际操作的过程中
一定要先阅读说明书或者
观察清楚光路的方向
确保光线通过的是比色杯的光面
第五
标准曲线斜率线性不好
或者在几个平行样之间的样品极差比较大
这种情况往往是因为同学在实验中
每台仪器一般会配备3~4个比色杯
需要在测定的过程中循环使用
如果润洗操作不到位
残留的待测物就会影响后续样品的测定
因此
在比色杯的润洗过程中
请务必注意
每次倒掉液体后都要用吸水纸
把杯口多余的液体吸净
但是千万不能把纸伸入到比色杯内部擦拭
以免留下纸屑影响后续的测定
把多余的液体吸完了之后
再用待测液润洗四面杯壁
润洗2~3次之后再加入待测液
那说到润洗
大家还要注意
你的待测液总液体量是多少
对于学生实验常用的分光光度计来说
一般使用的是一厘米直径的比色杯
而分光光度计的光路一般在
比色杯高度将近一半的位置
因此说每只比色杯中至少要装入
3~4毫升以上的液体
才不会影响测定
具体体积还要因仪器光路的高度稍有差异
一般来说
测定时液体的高度要在比色杯
的2/3~3/4比较合适
所以提醒大家
润洗的时候要特别注意用量
以免把比色杯洗得很干净
但是最后剩余液体不够测定了
在测定的过程中
每次打开样品池盖更换样品
都可能导致仪器的读数有所偏移
所以就需要将空白管一直保留在仪器内
每一次测定样品前均需要确认
空白管的透光率T=100%
然后再测定其他样品的吸光度值
分光光度计是生物化学实验中一般用于
标准曲线法测定待测物浓度的仪器
为了尽量降低待测物测定的误差
一般会对待测物设置平行样
也就是说同一个待测物按照相同
的操作步骤做多个样品
然后在完全相同的条件下进行同步分析
为了尽量减少样品间的误差
要将平行样在同一批次进行测定
总结来说
在分光光度计的使用过程中
请同学们注意以下几个细节
第一 千万不要忘记调节
和检查仪器的波长
第二
一定要手持比色杯的磨砂面
严禁手持光面
第三
加入液体后检查杯壁清洁
再放入分光光度计
第四
注意光路的方向
让比色杯的光面
置于光路上
第五
要注意润洗的操作
尽量去除残余液体的影响
第六
注意润洗液体的用量
以免剩余的液体不够测定
第七
每一轮测定都要用空白管调节透光率
第八
平行样要尽量在同一批次进行测定
在实际的实验操作过程中
请同学们注意将操作细节和我们之前
讲过的仪器测定原理相互印证
深刻理解其中的道理和操作的必要性
将操作的细节逐渐变成个人的操作习惯
才能确保所有测定的准确性
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-第二章 离心机的使用 作业
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