当前课程知识点:基础生物化学实验 > 第五章 物质的分离纯化 > 第二节 核酸的提取和检测 > 拟南芥叶片基因组DNA提取
之前,我讲解了碱裂解法制备大肠杆菌质粒DNA。这里我将简单介绍拟南芥叶片基因组DNA的制备。整个过程涉及四种溶液:
Ø 提取缓冲液:200 mM Tris-HCl (pH 7.4), 25 mM乙二胺四乙酸(EDTA),0.5% SDS,
250 mM NaCl,
Ø 异丙醇
Ø 70% 乙醇
Ø 100 mM Tris-HCl pH 8.0缓冲液
具体操作过程如下:
首先取一小片拟南芥叶片放入1.5 mL离心管中,用小研磨棒将叶片磨碎,加入400 µLDNA提取缓冲液,继续研磨均匀。三个过程如视频所示。
1. 13000 rpm,离心10min,转移上清液至新的1.5 mL离心管中,加入400 µL异丙醇,振荡,如视频所示,;-20℃静置4 min,以沉淀DNA;
2. 将离心管放入离心机,13000 rpm 离心10min,沉淀如图片1所示;弃去上清液,加入用1 mL 70%的乙醇洗涤沉淀,再次13000 rpm 离心10 min,弃上清,保留沉淀,
3. 室温晾干沉淀,大约15min;之后加入Tris-HCl pH 8.0的缓冲液 ,溶解DNA,-20℃保存备用。
让我们小结拟南芥叶片基因组DNA的制备流程吧。7
大家是否觉得这个实验似乎比提取质粒还简单呢?其实,有关植物基因组DNA的提取方法有很多,也有比较复杂的方法。但是,需要提醒的是,采用什么方法是依据于植物材料的特性和制备好的DNA使用目的而定的。现在的这个方法对于以拟南芥叶片为材料,提取DNA用于多聚酶链式反应(PCR)是比较简洁和易操作的。在今后的研究中,可以根据实验材料和实验目的选择不同的实验方法。
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--移液器的日常校准
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--离心机的操作要点
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-第二章 离心机的使用 作业
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