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SDS-PAGE电泳凝胶的染色在线视频

下一节:SDS-PAGE电泳凝胶的染色

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SDS-PAGE电泳凝胶的染色课程教案、知识点、字幕

同学们好

上节课我们学习了SDS-PAGE

的原理以及操作方法

电泳结束后蛋白质

条带肉眼是看不到的

需要通过染色的方法才能显现出来

从而检测它们的大小

纯度和含量

蛋白质的染色液和染色方法都有哪些

这节课我们就来学习

SDS-PAGE电泳凝胶的染色

电泳后有不同的染色方法

所用染色液的原理和灵敏度各不相同

实验室常用的蛋白质染色方法有

考马斯亮蓝染色法

以及银染法

我们称之为传统染色法

在传统染色法基础上也产生

了一些改进的快速染色法

使染色更为方便快速

蛋白质也可以采用荧光染色的方法

这种方法在蛋白质

组学研究中使用较多

考马斯亮蓝

染色法是SDS-PAGE电泳后

蛋白质染色最常用的方法

使用的染料是

考马斯亮蓝R-250

考马斯亮蓝R-250

中文名称是三苯基甲烷

能渗入凝胶与蛋白质的

碱性基团非共价结合

使蛋白质条带呈现蓝色

染料的结合量和蛋白质的量成正比

因此可以测定蛋白质的含量

考马斯亮蓝

检测的灵敏度可达到10纳克

考马斯亮蓝

染色法需要染色液和脱色液

染色液对蛋白质条带进行固定和染色

染色液也会与凝胶以低亲和力结合

因此需要脱色液将凝胶

背景处的染料去除

使蛋白质条带能清晰显示出来

SDS-PAGE电泳结束后

取出凝胶切去溴酚蓝前沿和浓缩胶后

将凝胶放入染色液中

放置在摇床上染色30分钟以上

然后倒出染色液

染色液可以回收使用几次

凝胶用清水漂洗一次后放入

装有脱色液的容器中

摇床震荡脱色到蛋白质条带清晰

的时候就可以停止脱色了

脱色期间需要更换三至四次脱色液

实验室常用的另一种传统

染色法是银染法

银染的方法很多

染色机制还不是很明确

可能是由染色液中的银离子

与氨基酸侧链基团结合

随后蛋白质条带上结合的银

离子被还原为金属银沉积

在蛋白质条带上显色

银染法的灵敏度比

考马斯亮蓝

染色法高100倍以上

可检测低至0.1纳克的蛋白质条带

与考马斯亮蓝

染色法相比

银染法操作步骤多

染色的时间比较长

因为银染具有不同的染色方法

这里我们就不详细介绍染色的过程了

感兴趣的同学可以在相关的实验

指南上查找到银染的方法

选择省时高效的银染方法

为了提高染色的效率和效果

研究者也在不断对染色方法进行改进

通过改变染色液的成分

提高染色的灵敏度

或者是在染色和脱色的过程中加热

来缩短染色和脱色的时间

这里提供的就是一份通过微波炉加热

染色和脱色过程的方案

可在半小时左右完成染色和脱色

与传统染色法数小时相比

大大缩短了染色的时间

现在各个公司也提供一些改良的

考马斯亮蓝

快速染色的试剂

同学们也可以选择使用

蛋白质染色还可以采用荧光染色法

在蛋白质组学研究中应用比较多

荧光染料种类很多

不同染料原理及操作有所不同

它综合了考染法和银染法的优点

灵敏度与银染相当

可检测低至0.25纳克或

1纳克左右的蛋白质条带

但是操作流程比银染法简单

与考染和银染一样

荧光染色通常在电泳后进行

需要固定和脱色凝胶用成像

系统进行观察和拍照

通过本节课的学习

我们了解了SDS-PAGE

银胶染色的传统方法

包括考染法和银染法

以及改进的快速染色法和荧光染色法

同学们可以根据实验

的要求和实验条件

选择经济高效的染色方法

基础生物化学实验课程列表:

第一章 课前须知

-第一节 基础生物化学实验学什么?

--《生物化学实验》学什么?

--《生物化学实验》学什么?

-第二节 本课程评分标准

--本课程评分标准

-第三节 如何更好的完成本课程的学习?

--不同需求的同学如何学习本课程?

--不同需求的同学如何学习本课程?

-第四节 生化实验室安全注意事项

--生化实验室安全注意事项

--生物化学实验室安全注意事项

-第五节 本课程教学团队介绍

--本课程团队介绍

--本课程教学团队介绍

-第六节 课前须知作业

--我对本课程的了解和疑惑

-第一章 课前须知 作业

第二章 生命科学三大必备仪器的使用

-第一节 移液器的设计原理和使用规范

--移液器的设计原理和使用规范

--移液器的设计原理和使用规范

-第二节 移液器的操作要点

--移液器的操作要点

--移液器的操作要点

--正向移液和反向移液

--正向移液和反向移液

--移液器的日常校准

--移液器的日常校准

--移液器的操作中易错点

--移液器操作中的易错点

--Eppendorf移液器操作手册

-第二章 移液器的使用 作业

--第二章 移液器的使用 作业

--请用思维导图或表格的形式列举移液器的使用要点

-第三节 分光光度计的设计原理和使用规范

--分光光度计的设计原理和使用规范

--分光光度计的设计原理和使用规范

-第四节 分光光度计的操作要点

--不同分光光度计的设计和操作差异

--不同分光光度计的设计和操作差异

--分光光度计的操作要点

--分光光度计的操作要点

-第五节 分光光度法测定待测物浓度

--分光光度法的原理

--分光光度法的原理

--分光光度法测定物质浓度的实验设计

--分光光度法测定物质浓度的实验设计

-第六节 荧光分光光度计的原理和使用规范

--荧光分光光度计的原理和使用规范

--荧光分光光度计的设计原理和使用规范

-第二章 分光光度计的使用 作业

--第二章 分光光度计的使用 作业

-第七节 离心机的设计原理和使用规范

--离心机的设计原理和使用规范

--离心机的设计原理和使用规范

--离心机的操作要点

--离心机的操作要点

-第二章 离心机的使用 作业

--第二章 离心机的使用 作业

-如何养成规范使用仪器设备的好习惯

第三章 物质的定量测定

-第一节 蛋白质的定量测定

--学习蛋白质定量测定的意义

--学习蛋白质定量测定的意义

--紫外法测定蛋白质浓度的实验原理

--紫外法测定蛋白质浓度的实验原理

--紫外法测定蛋白质的浓度的实验指导

--紫外法测定蛋白质浓度的操作方法

--紫外法测定蛋白质浓度的操作方法

--紫外法测定蛋白质浓度的实验数据计算

--紫外法测定蛋白质浓度的实验数据计算

--双缩脲法测定蛋白质浓度的实验原理和操作方法

--双缩脲法测定蛋白质的浓度的实验原理

--双缩脲法测定蛋白质浓度的实验指导

--双缩脲法测定蛋白质浓度的实验数据计算

--双缩脲法测定蛋白质浓度的实验数据计算

--Lowry法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--Lowry法测定蛋白质浓度的实验原理和操作方法

--Lowry法测定蛋白质的浓度的实验指导

--Bradford法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--Bradford法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--Bradford法测定蛋白质浓度的实验指导

--BCA法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--BCA法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--BCA法测定蛋白质浓度的实验指导

-第三节 其他物质的测定

--核黄素荧光光度定量测定法

--核黄素(VB2)荧光光度定量测定法

-第三章 物质的定量测定 作业

--第三章 物质的定量测定 作业

-你现在能独立设计一个生物分子的定量测定实验吗?

第四章 酶活力的测定

-第一节 酶活力测定的常用方法

--酶活力测定的常用方法

--酶活力测定的常用方法

-第二节 菠萝蛋白酶活力的测定

--菠萝蛋白酶活力测定的原理和操作(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶活力测定的原理和操作

--菠萝蛋白酶比活力的测定(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶比活力的测定(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶比活力测定的实验指导(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶活力的计算(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶活力的计算(Folin酚法)

-第三节 酶米氏常数的测定

--淀粉酶米氏常数的测定和计算

--淀粉酶米氏常数的测定和计算

--淀粉酶米氏常数测定的实验指导

--菠萝蛋白酶米氏常数测定的原理和操作(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶米氏常数测定的原理和操作(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶米氏常数测定的实验指导(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶米氏常数的计算(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶米氏常数的计算(Folin酚法)

-第四章 酶活力的测定 作业

--第四章 酶活力的测定 作业

-查阅一个你感兴趣的酶,想想怎么测?

第五章 物质的分离纯化

-第一节 蛋白质分离纯化的常见技术

--基因工程生产人血清白蛋白之路

--基因工程生产人血清白蛋白之路

--蛋白质分离的一般原则和基本步骤

--蛋白质分离的一般原则和基本步骤

--蛋白质的盐析提纯

--蛋白质的盐析提纯

--盐析操作注意事项

--盐析操作注意事项

--蛋白质的有机溶剂和等电点沉淀

--蛋白质的有机溶剂和等电点沉淀

--离子交换层析

--离子交换层析

--亲和层析

--亲和层析

--蛋白质的超速离心、透析和超滤

--蛋白质的超速离心、透析和超滤

--凝胶过滤层析的原理及凝胶颗粒选择

--凝胶过滤层析的原理及凝胶颗粒选择

--凝胶过滤层析的操作过程和注意事项

--凝胶过滤层析的操作过程和注意事项

--IMAC亲和层析

--IMAC亲和层析

--IMAC亲和层析技术的基本步骤

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--第五章 第一节 蛋白质的分离纯化 作业

-第二节 核酸的提取和检测

--核酸的制备原理及基本步骤

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--质粒DNA的提取制备

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--拟南芥叶片基因组DNA提取

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--紫外分光光度法测定核酸

--紫外分光光度法测定核酸

--第五章 第二节 核酸的提取 作业

-你想得到什么分子,如何纯化呢?

第六章 利用电泳对生物大分子进行检测

-第一节 核酸琼脂糖凝胶电泳

--核酸琼脂糖凝胶电泳的原理

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--核酸琼脂糖凝胶电泳的染色及结果分析

--核酸琼脂糖凝胶电泳的染色及结果分析

--核酸琼脂糖电泳-作业

-第二节 聚丙烯酰胺凝胶电泳

--SDS-PAGE电泳的原理

--SDS-PAGE电泳的原理

--SDS-PAGE电泳凝胶的染色

--SDS-PAGE电泳凝胶的染色

--利用SDS-PAGE计算蛋白质的分子质量

--利用SDS-PAGE计算蛋白质的分子质量

--聚丙烯酰胺凝胶的聚合原理及相关特性

--聚丙烯酰胺凝胶的聚合原理及相关特性

--SDS-PAGE的原理和操作-作业

-除了电泳,还有什么用于生物大分子鉴定的方法?

第七章 期末考试

-《基础生物化学实验》期末考试

-请留下你对本课程的宝贵建议

SDS-PAGE电泳凝胶的染色笔记与讨论

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