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紫外法测定蛋白质浓度的实验数据计算资料文件与下载

紫外法测定蛋白质浓度的实验数据计算

在学过了紫外法测定蛋白质浓度的实验原理和操作以后,我们一起来试试如何计算待测液中的蛋白质浓度吧。

我们首先来学习最常使用的标准曲线法计算待测液蛋白质浓度。这个表格中是一位同学做出的实验数据,他设计制作了标准曲线,并测定了一份纯蛋白质样品的吸光度A值,这是他的实验数据。

紫外测蛋白数据计算.png

我们可以用三种方法来制作标准曲线,第一种是坐标纸描图法,具体操作是:取一张坐标纸,在下部画一条横线,这是横坐标,左侧画一条竖线,这是纵坐标。根据所设计标准蛋白质的浓度分布,在横坐标轴上标记出各浓度点,并注明“蛋白质浓度”和浓度的单位,紫外法的浓度单位是mg/ml。在纵坐标轴根据数据所测定的吸光度范围标记处各吸光度点,并注明A280,在图上注明“紫外法测定蛋白质浓度标准曲线图”的名称,这样标记后整个标准曲线图就变得一目了然,方便自己和其他人查看。根据标准曲线各浓度和吸光度的对应关系,在坐标纸上标记处每一个标准曲线点,然后用一条经过原点的直线将所有点连接在一起,注意因为操作误差有的点可能不完全符合线性,划线时应将各点在线上线下均匀分布,这条就是本次紫外法测定蛋白质浓度的标准曲线。计算3个平行样品吸光度的平均值,结果为0.359,在纵轴找到这个点,此点开始画一条横线,与标准曲线交叉点处再画一条竖线,竖线与横轴的交叉点,读数,即为待测样品的浓度,本次测定结果约为0.500。

图片4.png

第二种方法是利用Excel等软件绘制散点图,图上同样要注明横坐标“蛋白质浓度”和单位,纵坐标A280,以及图的名称“紫外法测定蛋白质浓度标准曲线图”,便于自己和其他人查看。

然后通过“添加趋势线”的方法将这些点连接,并显示公式和R2,这样我们就获得了一个方程式。

图片5.png

同样取待测样吸光度的平均值,0.359,带入方程计算出浓度

x=(0.359-0.008)÷0.6999=0.502,

所以这个待测样的浓度就是0.502mg/ml。

图片6.png

R2还可以告诉我们标准曲线的线性程度,R2越接近1,说明标准曲线的线性越强,如果R2降低,需要检查实验设计的浓度范围是否在线性范围内,以及实验操作是否正确。

除了坐标纸描点和软件制图以外,还可以直接用计算器或软件对标准曲线的数据进行计算,得到拟合方程和R2,然后将待测样的平均值带入方程计算出浓度。

可是,我们的计算还没有结束,同学们还记得我们配制待测样的加样体积吗?我们是用1ml原始的待测液加3ml水配制的,所以相当于对原始待测液稀释4倍后才进行测定。因此,我们之前计算出的待测液浓度还要乘以4,计算出待测蛋白质溶液的浓度为2.008。我们在测定时将样品稀释是为了使其吸光度值落在标准曲线的中段,减少相对误差,计算的时候一定要记得乘以稀释倍数,得出原始溶液的浓度。

 


下一节:双缩脲法测定蛋白质浓度的实验原理和操作方法

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第一章 课前须知

-第一节 基础生物化学实验学什么?

--《生物化学实验》学什么?

--《生物化学实验》学什么?

-第二节 本课程评分标准

--本课程评分标准

-第三节 如何更好的完成本课程的学习?

--不同需求的同学如何学习本课程?

--不同需求的同学如何学习本课程?

-第四节 生化实验室安全注意事项

--生化实验室安全注意事项

--生物化学实验室安全注意事项

-第五节 本课程教学团队介绍

--本课程团队介绍

--本课程教学团队介绍

-第六节 课前须知作业

--我对本课程的了解和疑惑

-第一章 课前须知 作业

第二章 生命科学三大必备仪器的使用

-第一节 移液器的设计原理和使用规范

--移液器的设计原理和使用规范

--移液器的设计原理和使用规范

-第二节 移液器的操作要点

--移液器的操作要点

--移液器的操作要点

--正向移液和反向移液

--正向移液和反向移液

--移液器的日常校准

--移液器的日常校准

--移液器的操作中易错点

--移液器操作中的易错点

--Eppendorf移液器操作手册

-第二章 移液器的使用 作业

--第二章 移液器的使用 作业

--请用思维导图或表格的形式列举移液器的使用要点

-第三节 分光光度计的设计原理和使用规范

--分光光度计的设计原理和使用规范

--分光光度计的设计原理和使用规范

-第四节 分光光度计的操作要点

--不同分光光度计的设计和操作差异

--不同分光光度计的设计和操作差异

--分光光度计的操作要点

--分光光度计的操作要点

-第五节 分光光度法测定待测物浓度

--分光光度法的原理

--分光光度法的原理

--分光光度法测定物质浓度的实验设计

--分光光度法测定物质浓度的实验设计

-第六节 荧光分光光度计的原理和使用规范

--荧光分光光度计的原理和使用规范

--荧光分光光度计的设计原理和使用规范

-第二章 分光光度计的使用 作业

--第二章 分光光度计的使用 作业

-第七节 离心机的设计原理和使用规范

--离心机的设计原理和使用规范

--离心机的设计原理和使用规范

--离心机的操作要点

--离心机的操作要点

-第二章 离心机的使用 作业

--第二章 离心机的使用 作业

-如何养成规范使用仪器设备的好习惯

第三章 物质的定量测定

-第一节 蛋白质的定量测定

--学习蛋白质定量测定的意义

--学习蛋白质定量测定的意义

--紫外法测定蛋白质浓度的实验原理

--紫外法测定蛋白质浓度的实验原理

--紫外法测定蛋白质的浓度的实验指导

--紫外法测定蛋白质浓度的操作方法

--紫外法测定蛋白质浓度的操作方法

--紫外法测定蛋白质浓度的实验数据计算

--紫外法测定蛋白质浓度的实验数据计算

--双缩脲法测定蛋白质浓度的实验原理和操作方法

--双缩脲法测定蛋白质的浓度的实验原理

--双缩脲法测定蛋白质浓度的实验指导

--双缩脲法测定蛋白质浓度的实验数据计算

--双缩脲法测定蛋白质浓度的实验数据计算

--Lowry法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--Lowry法测定蛋白质浓度的实验原理和操作方法

--Lowry法测定蛋白质的浓度的实验指导

--Bradford法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--Bradford法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--Bradford法测定蛋白质浓度的实验指导

--BCA法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--BCA法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--BCA法测定蛋白质浓度的实验指导

-第三节 其他物质的测定

--核黄素荧光光度定量测定法

--核黄素(VB2)荧光光度定量测定法

-第三章 物质的定量测定 作业

--第三章 物质的定量测定 作业

-你现在能独立设计一个生物分子的定量测定实验吗?

第四章 酶活力的测定

-第一节 酶活力测定的常用方法

--酶活力测定的常用方法

--酶活力测定的常用方法

-第二节 菠萝蛋白酶活力的测定

--菠萝蛋白酶活力测定的原理和操作(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶活力测定的原理和操作

--菠萝蛋白酶比活力的测定(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶比活力的测定(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶比活力测定的实验指导(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶活力的计算(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶活力的计算(Folin酚法)

-第三节 酶米氏常数的测定

--淀粉酶米氏常数的测定和计算

--淀粉酶米氏常数的测定和计算

--淀粉酶米氏常数测定的实验指导

--菠萝蛋白酶米氏常数测定的原理和操作(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶米氏常数测定的原理和操作(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶米氏常数测定的实验指导(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶米氏常数的计算(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶米氏常数的计算(Folin酚法)

-第四章 酶活力的测定 作业

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-查阅一个你感兴趣的酶,想想怎么测?

第五章 物质的分离纯化

-第一节 蛋白质分离纯化的常见技术

--基因工程生产人血清白蛋白之路

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--蛋白质分离的一般原则和基本步骤

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--蛋白质的盐析提纯

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--盐析操作注意事项

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--蛋白质的有机溶剂和等电点沉淀

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--离子交换层析

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--亲和层析

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--蛋白质的超速离心、透析和超滤

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--凝胶过滤层析的原理及凝胶颗粒选择

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--凝胶过滤层析的操作过程和注意事项

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--IMAC亲和层析

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--IMAC亲和层析技术的基本步骤

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--第五章 第一节 蛋白质的分离纯化 作业

-第二节 核酸的提取和检测

--核酸的制备原理及基本步骤

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--质粒DNA的提取制备

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--拟南芥叶片基因组DNA提取

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--紫外分光光度法测定核酸

--紫外分光光度法测定核酸

--第五章 第二节 核酸的提取 作业

-你想得到什么分子,如何纯化呢?

第六章 利用电泳对生物大分子进行检测

-第一节 核酸琼脂糖凝胶电泳

--核酸琼脂糖凝胶电泳的原理

--核酸琼脂糖凝胶电泳的原理

--核酸琼脂糖凝胶电泳的染色及结果分析

--核酸琼脂糖凝胶电泳的染色及结果分析

--核酸琼脂糖电泳-作业

-第二节 聚丙烯酰胺凝胶电泳

--SDS-PAGE电泳的原理

--SDS-PAGE电泳的原理

--SDS-PAGE电泳凝胶的染色

--SDS-PAGE电泳凝胶的染色

--利用SDS-PAGE计算蛋白质的分子质量

--利用SDS-PAGE计算蛋白质的分子质量

--聚丙烯酰胺凝胶的聚合原理及相关特性

--聚丙烯酰胺凝胶的聚合原理及相关特性

--SDS-PAGE的原理和操作-作业

-除了电泳,还有什么用于生物大分子鉴定的方法?

第七章 期末考试

-《基础生物化学实验》期末考试

-请留下你对本课程的宝贵建议

紫外法测定蛋白质浓度的实验数据计算笔记与讨论

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