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核酸琼脂糖凝胶电泳的染色及结果分析在线视频

下一节:核酸琼脂糖凝胶电泳的染色及结果分析

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核酸琼脂糖凝胶电泳的染色及结果分析课程教案、知识点、字幕

同学们好

今天我们来学习和酸琼脂糖凝胶

电泳的染色及结果分析

经过琼脂糖凝胶电泳分离的DNA

我们肉眼看不到条带的位置

需要通过染色法检测和观察

分析样品的大小和纯度

可以采用凝胶内染色

也称为胶染法或电泳后

染色即泡染法观察

凝胶内染色是在电泳前制备凝胶时

将染料按一定比例加入

电泳后染色是在电泳结束后

将凝胶浸泡在含有染料的溶液中染色

这张表中总结了两种

方法的优点和缺点

凝胶内染色更方便

染料用量少

但是因为带正电的染料与

核酸的迁移方向相反

会影响低分子量样品的检测

特别是在长时间运行的情况下

此外与核酸结合的染料

会改变样品的迁移率

导致检测到样品的大小

与实际大小有差别

电泳后染色不影响样品的检测

是准确测定样品大小的首选方法

但是电泳后染色所需时间较长

染色液用量大

会产生更多的有害废物

了解了染色方法

现在我们来认识几种常见的核酸染料

有的是非荧光染料

有的是荧光染料

非荧光染料是与DNA通过离子

键结合来显示DNA的位置的

非荧光染料的灵敏度不如荧光类染料

但是非荧光类染料不需要紫外光激发

能够减少对DNA的破坏

常见的非荧光染料有噻嗪类染料

比如亚甲基蓝

除此之外含有尼罗蓝类染料

荧光染料与DNA结合后

可在某一波长的紫外光照射下观察

灵敏度比较高

荧光染料和非荧光染料各有优劣

我们可以根据实验的目的

和实验条件进行选择

目前实验室琼脂糖凝胶电泳结果的

观察中常用的是核酸的荧光染料

荧光染料有很多种类

这里我们以溴化乙锭和新型荧光

染料Gel-red为例进行介绍

实验室最常用最便宜的DNA染色液

使溴化乙锭简称为EB

这是溴化乙锭的结构式

溴化乙锭中的乙锭基团

可以嵌入到第一分子的碱基对之间

形成荧光络合物

紫外光照射后

DNA所在处发出橙黄色的光

因此我们可以观察到DNA的条带

溴化乙锭可以在电泳前制备

琼脂糖凝胶的过程中加入

通常将溴化乙锭配成10毫克

每毫升的储存液浓度

加入凝胶中的推荐浓度

是0.5微克每毫升

或者是在电泳结束后

将凝胶放入含有0.5微克每毫升

溴化乙锭的水或缓冲液中

染色30~45分钟

溴化乙锭可以检测到

少至10ng的DNA

需要注意的是溴化乙锭是

潜在的可致癌诱变剂

同学们在使用时一定要注意防护

避免直接接触皮肤

为了更安全高效的检测核酸条带

陆续开发出很多新型的荧光染料

Gel-red就是其中的一种

这是它的结构式

Gel-red有很好的稳定性

灵敏度和安全性

它的挥发性低

分子极性不强

难以穿透进入到细胞膜内

但是Gel-red并不是完全没有毒性

同学们使用时还是要注意防护

小心操作

通过核酸的琼脂糖凝胶

电泳和染色

我们就可以分离

并观察到分子量大小不同的DNA片段

如何确定待测DNA片段的大小

对于线性双链DNA片段来说

在一定范围内定义的迁移距离

与分子量的对数成反比

我们可以在电泳时将一系列

分子量已知的核酸样品

即分子量标准

与待测样品在同一块胶上进行电泳

比较分子量标准与待

测样品的迁移距离

从而可以推断待测样品的分子量大小

下面我们以这张实际的

电泳图谱为例进行分析

最左侧这列是分子量标准

它的各条条带的大小

如图中所示

待测样品是PCR的产物

预计大小是170bp

电泳后条带的位置位于200bp和

100bp之间更接近200bp

因此我们可以初步判断

这是我们的目的条带

后续可以通过测序等方法

进行进一步的鉴定

此外

因为分子量标准中每一条

条带的含量是已知的

通过比较待测样品条带亮度

与分子量标准条带的亮度

还可以判断样品中的DNA的浓度

本节课中我们了解了琼脂糖凝胶

电泳的荧光

染料

溴化乙锭以及新型核酸染料

Gel-red的染色原理和特点

同时也学习了核酸琼脂糖凝胶

电泳后的结果分析的方法

同学们在实验过程中选择了什么

核酸染料

有没有遇到什么问题

可以在讨论区和我们展开讨论

基础生物化学实验课程列表:

第一章 课前须知

-第一节 基础生物化学实验学什么?

--《生物化学实验》学什么?

--《生物化学实验》学什么?

-第二节 本课程评分标准

--本课程评分标准

-第三节 如何更好的完成本课程的学习?

--不同需求的同学如何学习本课程?

--不同需求的同学如何学习本课程?

-第四节 生化实验室安全注意事项

--生化实验室安全注意事项

--生物化学实验室安全注意事项

-第五节 本课程教学团队介绍

--本课程团队介绍

--本课程教学团队介绍

-第六节 课前须知作业

--我对本课程的了解和疑惑

-第一章 课前须知 作业

第二章 生命科学三大必备仪器的使用

-第一节 移液器的设计原理和使用规范

--移液器的设计原理和使用规范

--移液器的设计原理和使用规范

-第二节 移液器的操作要点

--移液器的操作要点

--移液器的操作要点

--正向移液和反向移液

--正向移液和反向移液

--移液器的日常校准

--移液器的日常校准

--移液器的操作中易错点

--移液器操作中的易错点

--Eppendorf移液器操作手册

-第二章 移液器的使用 作业

--第二章 移液器的使用 作业

--请用思维导图或表格的形式列举移液器的使用要点

-第三节 分光光度计的设计原理和使用规范

--分光光度计的设计原理和使用规范

--分光光度计的设计原理和使用规范

-第四节 分光光度计的操作要点

--不同分光光度计的设计和操作差异

--不同分光光度计的设计和操作差异

--分光光度计的操作要点

--分光光度计的操作要点

-第五节 分光光度法测定待测物浓度

--分光光度法的原理

--分光光度法的原理

--分光光度法测定物质浓度的实验设计

--分光光度法测定物质浓度的实验设计

-第六节 荧光分光光度计的原理和使用规范

--荧光分光光度计的原理和使用规范

--荧光分光光度计的设计原理和使用规范

-第二章 分光光度计的使用 作业

--第二章 分光光度计的使用 作业

-第七节 离心机的设计原理和使用规范

--离心机的设计原理和使用规范

--离心机的设计原理和使用规范

--离心机的操作要点

--离心机的操作要点

-第二章 离心机的使用 作业

--第二章 离心机的使用 作业

-如何养成规范使用仪器设备的好习惯

第三章 物质的定量测定

-第一节 蛋白质的定量测定

--学习蛋白质定量测定的意义

--学习蛋白质定量测定的意义

--紫外法测定蛋白质浓度的实验原理

--紫外法测定蛋白质浓度的实验原理

--紫外法测定蛋白质的浓度的实验指导

--紫外法测定蛋白质浓度的操作方法

--紫外法测定蛋白质浓度的操作方法

--紫外法测定蛋白质浓度的实验数据计算

--紫外法测定蛋白质浓度的实验数据计算

--双缩脲法测定蛋白质浓度的实验原理和操作方法

--双缩脲法测定蛋白质的浓度的实验原理

--双缩脲法测定蛋白质浓度的实验指导

--双缩脲法测定蛋白质浓度的实验数据计算

--双缩脲法测定蛋白质浓度的实验数据计算

--Lowry法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--Lowry法测定蛋白质浓度的实验原理和操作方法

--Lowry法测定蛋白质的浓度的实验指导

--Bradford法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--Bradford法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--Bradford法测定蛋白质浓度的实验指导

--BCA法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--BCA法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--BCA法测定蛋白质浓度的实验指导

-第三节 其他物质的测定

--核黄素荧光光度定量测定法

--核黄素(VB2)荧光光度定量测定法

-第三章 物质的定量测定 作业

--第三章 物质的定量测定 作业

-你现在能独立设计一个生物分子的定量测定实验吗?

第四章 酶活力的测定

-第一节 酶活力测定的常用方法

--酶活力测定的常用方法

--酶活力测定的常用方法

-第二节 菠萝蛋白酶活力的测定

--菠萝蛋白酶活力测定的原理和操作(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶活力测定的原理和操作

--菠萝蛋白酶比活力的测定(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶比活力的测定(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶比活力测定的实验指导(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶活力的计算(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶活力的计算(Folin酚法)

-第三节 酶米氏常数的测定

--淀粉酶米氏常数的测定和计算

--淀粉酶米氏常数的测定和计算

--淀粉酶米氏常数测定的实验指导

--菠萝蛋白酶米氏常数测定的原理和操作(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶米氏常数测定的原理和操作(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶米氏常数测定的实验指导(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶米氏常数的计算(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶米氏常数的计算(Folin酚法)

-第四章 酶活力的测定 作业

--第四章 酶活力的测定 作业

-查阅一个你感兴趣的酶,想想怎么测?

第五章 物质的分离纯化

-第一节 蛋白质分离纯化的常见技术

--基因工程生产人血清白蛋白之路

--基因工程生产人血清白蛋白之路

--蛋白质分离的一般原则和基本步骤

--蛋白质分离的一般原则和基本步骤

--蛋白质的盐析提纯

--蛋白质的盐析提纯

--盐析操作注意事项

--盐析操作注意事项

--蛋白质的有机溶剂和等电点沉淀

--蛋白质的有机溶剂和等电点沉淀

--离子交换层析

--离子交换层析

--亲和层析

--亲和层析

--蛋白质的超速离心、透析和超滤

--蛋白质的超速离心、透析和超滤

--凝胶过滤层析的原理及凝胶颗粒选择

--凝胶过滤层析的原理及凝胶颗粒选择

--凝胶过滤层析的操作过程和注意事项

--凝胶过滤层析的操作过程和注意事项

--IMAC亲和层析

--IMAC亲和层析

--IMAC亲和层析技术的基本步骤

--IMAC亲和层析技术的基本步骤

--第五章 第一节 蛋白质的分离纯化 作业

-第二节 核酸的提取和检测

--核酸的制备原理及基本步骤

--核酸的制备原理及基本步骤

--质粒DNA的提取制备

--质粒DNA的提取制备

--拟南芥叶片基因组DNA提取

--拟南芥叶片基因组DNA提取

--紫外分光光度法测定核酸

--紫外分光光度法测定核酸

--第五章 第二节 核酸的提取 作业

-你想得到什么分子,如何纯化呢?

第六章 利用电泳对生物大分子进行检测

-第一节 核酸琼脂糖凝胶电泳

--核酸琼脂糖凝胶电泳的原理

--核酸琼脂糖凝胶电泳的原理

--核酸琼脂糖凝胶电泳的染色及结果分析

--核酸琼脂糖凝胶电泳的染色及结果分析

--核酸琼脂糖电泳-作业

-第二节 聚丙烯酰胺凝胶电泳

--SDS-PAGE电泳的原理

--SDS-PAGE电泳的原理

--SDS-PAGE电泳凝胶的染色

--SDS-PAGE电泳凝胶的染色

--利用SDS-PAGE计算蛋白质的分子质量

--利用SDS-PAGE计算蛋白质的分子质量

--聚丙烯酰胺凝胶的聚合原理及相关特性

--聚丙烯酰胺凝胶的聚合原理及相关特性

--SDS-PAGE的原理和操作-作业

-除了电泳,还有什么用于生物大分子鉴定的方法?

第七章 期末考试

-《基础生物化学实验》期末考试

-请留下你对本课程的宝贵建议

核酸琼脂糖凝胶电泳的染色及结果分析笔记与讨论

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