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菠萝蛋白酶活力的计算(Folin酚法)课程教案、知识点、字幕

我们在经过酶反应和酪氨酸测定之后

就会得到一系列680纳米

波长下的吸光度值

并且通过Bradford法测定了

菠萝蛋白酶溶液中的蛋白质浓度

也得到了一系列的吸光度值

接下来我们一起来看看如何利用这些

数据来计算菠萝蛋白酶的比活力

首先我们需要计算出0.5毫升

标准曲线体系中的酪氨酸浓度

以酪氨酸的浓度为横坐标

以680纳米的吸光度值为纵

坐标来绘制酪氨酸标准曲线

计算三支酶测定管的吸光度值

的平均值得到0.475

将测定管的吸光度值减去

对照管的吸光度值

等于0.425

然后通过拟合方程计算吸光度值对应的

酪氨酸浓度酶促反应时间中生成的酪氨酸

浓度就等于0.0618毫克每毫升

这就是酶促反应时间10分钟内

生成的酪氨酸在体系中的浓度

所以我们用浓度乘以体系的体积

就可以知道体系中有多少微克的酪氨酸

那么这个体系的体积应该是多少呢

我们来回顾一下酶学部分的实验过程

每管体系中含有0.5毫升的缓冲液

0.5毫升的酶液

一毫升的酪蛋白溶液和一毫升的

三氯乙酸溶液总共是三毫升

这里同学们可能会问

为什么要加上三氯乙酸呢

这时候不是没有酶反应了

为什么不应该只包含缓冲

液酶和酪蛋白溶液呢

请注意

各位同学在做酶学计算的时候

一定要注意区分反应体系和测定体系

我们测定的酪氨酸浓度是在加入

三氯乙酸之后的上清中

所以此时的浓度应该是加入三氯乙酸

之后的三毫升体系中的浓度

我们用浓度乘以3毫升的体积

就可以知道体系中生成

了多少微克的酪氨酸

也就是0.0618毫克每毫升乘以

3毫升等于0.185毫克

也就是185微克

到此为止

我们就计算出了10分钟酶反应时间

中总共生成了185微克的酪氨酸

而我们对菠萝蛋白酶活力的规定是

每分钟水解酪蛋白生成一微克酪氨酸

的酶量为一个酶活力单位

因此每管反应体系中的酶活力单位

就等于酪氨酸的量除以10分钟

也就是185÷10

就是18.5个U

这些活力单位是我们在测定过程中加入

体系的0.5毫升酶液中的活力单位

所以可以计算出每毫升

酶液中的活力单位数

也就是18.5U÷0.5毫升

等于37U每毫升

这就是酶液中的活力单位

接下来我们继续计算菠萝蛋白酶的比活力

这需要测定和计算此溶液中的蛋白质浓度

我们采用的是Bradford法

以下是实验数据

我们同样需要先计算一系列

标准曲线的蛋白质浓度

然后以蛋白质浓度为横坐标

以595纳米的吸光度值

为纵坐标绘制标准曲线

计算三只样品管的吸光度

的平均值0.349

通过拟合方程计算样品管中蛋白质的浓度

就得到0.13毫克每毫升

也就是说这份酶溶液它的蛋白质

浓度是0.13毫克每毫升

最后一步计算菠萝蛋白酶的比活力

比活力的单位是每毫克蛋白

中含有的活力单位数

所以我们用前面计算出的酶液中

的酶活力含量37U每毫升

除以蛋白质浓度0.13毫克每毫升

也就等于284.615U每毫克

这就是酶活力和比活力的计算方法

同学们在实际计算过程中

注意思考

每一步计算的意义掌握

酶活力测定和计算的思路

就可以顺利的完成所有

酶活力的测定实验了

基础生物化学实验课程列表:

第一章 课前须知

-第一节 基础生物化学实验学什么?

--《生物化学实验》学什么?

--《生物化学实验》学什么?

-第二节 本课程评分标准

--本课程评分标准

-第三节 如何更好的完成本课程的学习?

--不同需求的同学如何学习本课程?

--不同需求的同学如何学习本课程?

-第四节 生化实验室安全注意事项

--生化实验室安全注意事项

--生物化学实验室安全注意事项

-第五节 本课程教学团队介绍

--本课程团队介绍

--本课程教学团队介绍

-第六节 课前须知作业

--我对本课程的了解和疑惑

-第一章 课前须知 作业

第二章 生命科学三大必备仪器的使用

-第一节 移液器的设计原理和使用规范

--移液器的设计原理和使用规范

--移液器的设计原理和使用规范

-第二节 移液器的操作要点

--移液器的操作要点

--移液器的操作要点

--正向移液和反向移液

--正向移液和反向移液

--移液器的日常校准

--移液器的日常校准

--移液器的操作中易错点

--移液器操作中的易错点

--Eppendorf移液器操作手册

-第二章 移液器的使用 作业

--第二章 移液器的使用 作业

--请用思维导图或表格的形式列举移液器的使用要点

-第三节 分光光度计的设计原理和使用规范

--分光光度计的设计原理和使用规范

--分光光度计的设计原理和使用规范

-第四节 分光光度计的操作要点

--不同分光光度计的设计和操作差异

--不同分光光度计的设计和操作差异

--分光光度计的操作要点

--分光光度计的操作要点

-第五节 分光光度法测定待测物浓度

--分光光度法的原理

--分光光度法的原理

--分光光度法测定物质浓度的实验设计

--分光光度法测定物质浓度的实验设计

-第六节 荧光分光光度计的原理和使用规范

--荧光分光光度计的原理和使用规范

--荧光分光光度计的设计原理和使用规范

-第二章 分光光度计的使用 作业

--第二章 分光光度计的使用 作业

-第七节 离心机的设计原理和使用规范

--离心机的设计原理和使用规范

--离心机的设计原理和使用规范

--离心机的操作要点

--离心机的操作要点

-第二章 离心机的使用 作业

--第二章 离心机的使用 作业

-如何养成规范使用仪器设备的好习惯

第三章 物质的定量测定

-第一节 蛋白质的定量测定

--学习蛋白质定量测定的意义

--学习蛋白质定量测定的意义

--紫外法测定蛋白质浓度的实验原理

--紫外法测定蛋白质浓度的实验原理

--紫外法测定蛋白质的浓度的实验指导

--紫外法测定蛋白质浓度的操作方法

--紫外法测定蛋白质浓度的操作方法

--紫外法测定蛋白质浓度的实验数据计算

--紫外法测定蛋白质浓度的实验数据计算

--双缩脲法测定蛋白质浓度的实验原理和操作方法

--双缩脲法测定蛋白质的浓度的实验原理

--双缩脲法测定蛋白质浓度的实验指导

--双缩脲法测定蛋白质浓度的实验数据计算

--双缩脲法测定蛋白质浓度的实验数据计算

--Lowry法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--Lowry法测定蛋白质浓度的实验原理和操作方法

--Lowry法测定蛋白质的浓度的实验指导

--Bradford法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--Bradford法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--Bradford法测定蛋白质浓度的实验指导

--BCA法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--BCA法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--BCA法测定蛋白质浓度的实验指导

-第三节 其他物质的测定

--核黄素荧光光度定量测定法

--核黄素(VB2)荧光光度定量测定法

-第三章 物质的定量测定 作业

--第三章 物质的定量测定 作业

-你现在能独立设计一个生物分子的定量测定实验吗?

第四章 酶活力的测定

-第一节 酶活力测定的常用方法

--酶活力测定的常用方法

--酶活力测定的常用方法

-第二节 菠萝蛋白酶活力的测定

--菠萝蛋白酶活力测定的原理和操作(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶活力测定的原理和操作

--菠萝蛋白酶比活力的测定(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶比活力的测定(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶比活力测定的实验指导(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶活力的计算(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶活力的计算(Folin酚法)

-第三节 酶米氏常数的测定

--淀粉酶米氏常数的测定和计算

--淀粉酶米氏常数的测定和计算

--淀粉酶米氏常数测定的实验指导

--菠萝蛋白酶米氏常数测定的原理和操作(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶米氏常数测定的原理和操作(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶米氏常数测定的实验指导(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶米氏常数的计算(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶米氏常数的计算(Folin酚法)

-第四章 酶活力的测定 作业

--第四章 酶活力的测定 作业

-查阅一个你感兴趣的酶,想想怎么测?

第五章 物质的分离纯化

-第一节 蛋白质分离纯化的常见技术

--基因工程生产人血清白蛋白之路

--基因工程生产人血清白蛋白之路

--蛋白质分离的一般原则和基本步骤

--蛋白质分离的一般原则和基本步骤

--蛋白质的盐析提纯

--蛋白质的盐析提纯

--盐析操作注意事项

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--蛋白质的有机溶剂和等电点沉淀

--蛋白质的有机溶剂和等电点沉淀

--离子交换层析

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--亲和层析

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--蛋白质的超速离心、透析和超滤

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--凝胶过滤层析的原理及凝胶颗粒选择

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--凝胶过滤层析的操作过程和注意事项

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--IMAC亲和层析

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--IMAC亲和层析技术的基本步骤

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--第五章 第一节 蛋白质的分离纯化 作业

-第二节 核酸的提取和检测

--核酸的制备原理及基本步骤

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--质粒DNA的提取制备

--质粒DNA的提取制备

--拟南芥叶片基因组DNA提取

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--紫外分光光度法测定核酸

--紫外分光光度法测定核酸

--第五章 第二节 核酸的提取 作业

-你想得到什么分子,如何纯化呢?

第六章 利用电泳对生物大分子进行检测

-第一节 核酸琼脂糖凝胶电泳

--核酸琼脂糖凝胶电泳的原理

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--核酸琼脂糖凝胶电泳的染色及结果分析

--核酸琼脂糖凝胶电泳的染色及结果分析

--核酸琼脂糖电泳-作业

-第二节 聚丙烯酰胺凝胶电泳

--SDS-PAGE电泳的原理

--SDS-PAGE电泳的原理

--SDS-PAGE电泳凝胶的染色

--SDS-PAGE电泳凝胶的染色

--利用SDS-PAGE计算蛋白质的分子质量

--利用SDS-PAGE计算蛋白质的分子质量

--聚丙烯酰胺凝胶的聚合原理及相关特性

--聚丙烯酰胺凝胶的聚合原理及相关特性

--SDS-PAGE的原理和操作-作业

-除了电泳,还有什么用于生物大分子鉴定的方法?

第七章 期末考试

-《基础生物化学实验》期末考试

-请留下你对本课程的宝贵建议

菠萝蛋白酶活力的计算(Folin酚法)笔记与讨论

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