当前课程知识点:基础生物化学实验 > 第二章 生命科学三大必备仪器的使用 > 第三节 分光光度计的设计原理和使用规范 > 分光光度计的设计原理和使用规范
每一位从事生命科学研究的朋友
都会面临到液体转移的问题
当我们要转移很大量液体
而且不用定量的时候
简单粗暴的倒就可以了
而当我们要转移大量液体
又需要定量的时候
就需要用到烧杯 量筒
溶量瓶等定量容器
可是在现代生命科学研究的过程中
最常操作的往往是转移小量液体
这个时候我们最直接的
就是采用滴管来完成
可是大家想一下
用滴管完成有什么不方便之处
第一用滴管不能精确定量怎么办
第二滴管每次用完以后
如果你更换液体就得清洗
大家是不是很累呢
这个时候我们就要用到一种科研神器
微量手动可调液器
也就是在实验室里大家常说的枪
移液器的设计和滴管的原理相似
说到原理
我们先来想一下滴管的工作原理
我们把滴管的使用动作分解一下
第1步我们会按下胶头挤出一定量的空气
第2步会把滴管伸进液体里
松开胶头让胶皮回弹
这时候滴管内的气压变小
液体就会上移进入滴管
第3步
把滴管对准另一个容器
按下胶头挤压滴管内的液体进入新容器
液器在设计中也是这样
三步转移液体
不过为了便于定量液器采用了弹簧
来实现挤压和回弹的过程
这样我们就只需要通过旋转调节钮
压缩弹簧到所需要的长度
就可以精确控制每次挤压排出的空气量
从而消除了滴管使用中不能定量的弊端
接下来还有一个问题
滴管每次转移完
不同液体都要彻底清洗
避免污染
移液器也是要这样洗吗
当然不用
为了实现科研工作中快速转移各种液体的
需要
设计者为移液器设计了可以便携更换的吸头
吸液体的时候
在移液器的下端插入一个干净的吸头
所有的液体全部都在吸头里
不会污染移液器
这样每次更换转移液体的时候
只需要打掉用过的吸头
再换一个新的吸头就好了
而且因为吸头的成本很低
都是一次性使用的
不仅从根本上避免了滴管
洗涤不净的污染问题
还免除了大家大量的洗涤工作
是不是很方便呢
移液器是很方便
可是不代表它十全十美
如果你使用不当的话
它带来的影响可是比滴馆还糟糕
首先
移液器每次换吸头不用洗倒是很方便
但是大家想一想
吸头和移液器不是一体的
每次都是通过按压组合在一起
所以万一你插不紧
吸头和移液器之间有漏气
你吸上来的液体肯定小于你设置的体积
既然这样
我们是不是要大力的来戳吸头
以确保液器和吸头之间插得紧紧的呢
大力的戳吸头震动会损坏
移液器内部的精密部件
而且还不一定会让吸头完全不漏气
因为你大力戳的时候
吸头可能会在某个角度卡
在液器上仿佛插紧了
实际还是有缝隙
就好像我们在生活中有的
时候瓶盖好像拧紧了
其实只是角度不对
卡住了
实际上还在漏水
应该怎么办呢
正确的做法是
插吸头的时候
垂直向下用力旋转或前后活动一下移液器
确保吸头和移液器之间均匀贴合
这样才能最大限度上避免漏气
是不是 只要吸头插的好
转移液体就一定是准的
也不一定
接下来我们就要说到第2个
可能影响你吸液准确度的操作了
大家看看吸头的样子
是不是上面粗
下面的吸孔很细 很小
对不对
吸孔做的小
可以提高转移体积的精度
但问题是如果吸头里面的气压变化太快
液体超快速上升的话
就会像喷泉一样往上喷
很容易进入移液器内部污染移液器
如果液体进入了移液器的管道
不仅会腐蚀和损坏内部的部件
造成移液不准
还有可能在你下次转移其他
试剂的时候造成交叉污染
影响你的实验结果
所以我们在吸液体和排出液体的时候
一定要适当的控制速度
确保液体均匀稳定地上升进入吸头
或者是缓慢的推出吸头
这样可以保护移液器
而且还能提高你实验的准确度和可信度
除了以上讲的垂直向下 用力略旋转
叉吸头和吸放液慢一些之外
还有一点是要注意的
大家在转移液体的时候就会发现
如果我们把转移体积设定好
比如我设定900微升
按下移液器的控制钮
打出900微升空气
将固定好的吸头插入液体液面
以下缓慢松开移液器控制钮
吸上来900微升的液体
然后再把移液器放在新容器的上方
按下控制钮
打出900微升的液体
这时候你会发现
吸头的尖部会残留一小部分液体
这是因为贴着吸头壁的液体
下行速度稍微慢一点
就滞留在吸头里了
所以你实际转移出去的液体
是比900微升要少的
这怎么办呢
这时候你就需要用更大的力气
继续按控制钮
是不是发现还可以往下再按一段距离
这段距离是在你设定体积之外的
就是为了让你继续把滞留在吸头
尖部的液体全打出去设计的
你轻轻按控制扭到第1个
好像按不动的位置
这个叫第一停点
继续加大力度
按照彻底按不动的位置叫做第二停点
同学们第一次使用移液器的时候
一定要先用心感受第一停
点和第二停点的位置
再开始吸液
所以我们每次使用移液器的时候
流程是这样的
首先调整体积
安装吸头按控制钮到第一停点
然后将吸头插入液体液面以下
匀速松开控制钮
让液体进入吸头
在新的容器中匀速按压控制钮
直到第二停点
打出所有的液体
好了
我们最后再来回忆一下移液器使用
中最基本最重要的三个注意事项
第一插吸头的时候要垂直向下
用力旋转或前后活动一下
移液器让吸头插紧
第二
吸入或放出液体的时候要匀速
不能太快
第三
吸液体前按控制钮到第一停点
放液体的时候则要按到第二停点
确保吸头内的液体全部打出
熟练掌握了这三条注意事项
一般的液体定量转移
你就都可以胜任了
此外关于移液器的使用
还有一些操作小技巧
可以让你的转移精度更高
还有一些移液器的校准方法
可以进一步保证你转移液体的准确度
所以请继续学习移液器的操作
要点和日常校准等内容
-第一节 基础生物化学实验学什么?
-第二节 本课程评分标准
--本课程评分标准
-第三节 如何更好的完成本课程的学习?
-第四节 生化实验室安全注意事项
-第五节 本课程教学团队介绍
--本课程团队介绍
-第六节 课前须知作业
-第一章 课前须知 作业
-第一节 移液器的设计原理和使用规范
-第二节 移液器的操作要点
--移液器的操作要点
--移液器的操作要点
--移液器的日常校准
--移液器的日常校准
-第二章 移液器的使用 作业
--第二章 移液器的使用 作业
-第三节 分光光度计的设计原理和使用规范
-第四节 分光光度计的操作要点
-第五节 分光光度法测定待测物浓度
--分光光度法的原理
--分光光度法的原理
-第六节 荧光分光光度计的原理和使用规范
-第二章 分光光度计的使用 作业
--第二章 分光光度计的使用 作业
-第七节 离心机的设计原理和使用规范
--离心机的操作要点
--离心机的操作要点
-第二章 离心机的使用 作业
--第二章 离心机的使用 作业
-第一节 蛋白质的定量测定
-第三节 其他物质的测定
-第三章 物质的定量测定 作业
--第三章 物质的定量测定 作业
-第一节 酶活力测定的常用方法
-第二节 菠萝蛋白酶活力的测定
-第三节 酶米氏常数的测定
-第四章 酶活力的测定 作业
--第四章 酶活力的测定 作业
-第一节 蛋白质分离纯化的常见技术
--蛋白质的盐析提纯
--蛋白质的盐析提纯
--盐析操作注意事项
--盐析操作注意事项
--离子交换层析
--离子交换层析
--亲和层析
--亲和层析
--IMAC亲和层析
--IMAC亲和层析
--第五章 第一节 蛋白质的分离纯化 作业
-第二节 核酸的提取和检测
--第五章 第二节 核酸的提取 作业
-第一节 核酸琼脂糖凝胶电泳
--核酸琼脂糖电泳-作业
-第二节 聚丙烯酰胺凝胶电泳
--SDS-PAGE的原理和操作-作业
-《基础生物化学实验》期末考试