当前课程知识点:基础生物化学实验 > 第二章 生命科学三大必备仪器的使用 > 第二节 移液器的操作要点 > 移液器的操作要点
我们已经了解了移液器的操作原理和基本流程,但实际移液过程中还有一些细节是我们需要特别注意的,否则还是无法完全保证移液体积的准确,那么在移液器实际使用中都有哪些操作要点和注意事项呢?
首先,是移液器量程的选择,同学们,实验室常用的移液器有很多型号,比如1000-5000ul、200-1000ul、20-200ul、1-20ul,那么当你要做一次液体转移时你会如何选择呢?比如你要转移200ul的液体,是用200-1000ul的移液器还是用20-200ul的移液器呢?
实验显示,移液器最大量程的30%—100%是最佳使用范围,比如转移100ul液体,如果用10-100ul的移液器,转移误差不到1%;如用20-200ul移液器,转移误差1%,如用10-1000ul移液器,转移误差则会增加到3%。
其次,吸取液体时一定要注意垂直吸液,因为根据流体静力压原理,移液器斜着吸液将使体积偏大,转移精度降低。而放出液体时,可根据实际需要,选择将移液器以20°-45°角度贴壁打出液体,或者垂直悬空打出液体,悬空打出液体的好处是可以避免污染,可再次使用相同吸头转移相同液体。
此外,实验结果表明,第一次和第二次转移液体会造成转移量较少,所以如果需要高精确度转移,最好将液体吸入打出反复两次,预先润湿吸头内部,再按要求转移液体。
不仅如此,吸取液体后最好让吸头尖部在液体里稍稍停留1秒,(特别是对于大量程的移液器),确保吸取足够量液体,而且保证吸入、放出液体的过程匀速操作,避免造成转移体积不准。
最后还要提醒一下,根据移液器的设计原理,旋转刻度调节体积的时候,从大量程调节至小量程,直接旋转即可得到最佳精度;而需要从小量程调节至大量程时,最好先调至略大一点,再返回调至计划体积。这也很好理解,因为弹簧从压缩状态回弹需要一个过程,而从高到低的压缩过程则可以直接准确到达。
而且,为了保护弹簧,移液器使用后应调至最大量程,让内部弹簧处于放松状态,放回支架,避免弹簧长期处于压缩状态,引起弹性形变,造成移液误差。
最后,我们来总结一下,保证移液精度的几点注意事项:
1. 选择合适量程的移液器;
2. 保证垂直吸液体;
3. 可预润湿吸头提高精度;
4. 吸取液体后吸头在液体里停留1秒,保证移液体积;
5. 吸入、放出液体的过程匀速操作;
6. 要保证移液准确,调节体积的时候,要从大量程调节至小量程;
7. 使用后调至最大量程并放回移液器架。
总得来说,我们使用移液器的基本原则就是保证移液准确、无污染,所以一切操作都是为此目的服务,在实际操作过程中,要注意多思考,让每次转移都能做到准确无污染,并将这些操作养成习惯,在今后的研究中才能真正高效的完成实验工作。
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