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菠萝蛋白酶米氏常数的计算(Folin酚法)课程教案、知识点、字幕

顺利完成菠萝蛋白酶

米氏常数的测定实验后

我们得到了一系列的实验数据

而且同学们已经学习过双倒数作图法

计算米氏常数的思路和注意事项

所以请你自己练习一下

用这组数据计算菠萝蛋白酶的米氏常数

KM值

接下来我们一起来看看你的计算过程

和结果跟我们的计算过程是否一致

米氏方程双倒数作图的公式是这样的

所以我们需要用S分之一为横坐标

以V分之1为纵坐标来作图

我们要分别计算出每支酶反应

管中的底物浓度和反应速度

我们先来计算每支酶反应管里的反应速度

也就是每一支管中每分钟

生成酪氨酸的浓度

这就要知道个管中的酪氨酸浓度

所以第1步先要计算酪氨酸

标准曲线的浓度

绘制酪氨酸浓度的标准曲线

接下来计算不同底物浓度的酶反应管中

在酶促反应时间里生成产物的吸光度

也就是用个测定管的吸光度

值减去空白管的吸光度值

利用酪氨酸浓度的标准曲线拟合方程

计算出各酶反应管中生成的酪氨酸浓度

接下来我们需要计算各个

酶反应管中的反应速度

反应速度应该是每分钟生成酪氨酸的浓度

所以请注意

这里最关键的问题是计算的是

哪个体系中的酪氨酸浓度

是缓冲液加酪蛋白

加酶液的两毫升体系

还是缓冲液加酪蛋白加酶液加

三氯乙酸的3毫升体系中吗

我们在前面的学习中已经详细讨论过

应该是计算缓冲液加

酪蛋白加酶液的酶反应体系

也就是两毫升体系中的酪氨酸浓度

而我们现在算出的这些酪氨酸浓度

是缓冲液加酪蛋白加酶液加三氯乙酸

的3毫升测定体系中的酪氨酸浓度

因此这些数值还需要乘以除以2

换算成两毫升的

酶反应体系中的浓度

并除以反应时间10分钟

得出各酶反应管的反应速度

并进而计算出各管中的1/v

此时我们还需要知道各酶

反应管中的底物浓度

浓度的计算步骤很简单

不过需要确定的是底物浓度

不是初始加入的底物浓度

而是两毫升的酶反应体系中的底物浓度

所以我们需要将初始加入底物的体积

乘以10毫克每毫升的浓度

再除以两毫升的酶反应体系体积

计算出各酶促反应管中的底物浓度S

并进而计算出1/S

然后以1/S为横坐标

以1/v为纵坐标绘制双倒数图

我们知道米氏方程可以写成

这种双倒数的形式

我们以1/S为横坐标

以1/v为纵坐标

绘制的曲线斜率就等于KM/Vmax

而曲线的纵截距就为1/Vmax

所以我们的拟合方程中截距

34.139=1/Vmax

由此就可以计算出Vmax等于1除以截距

等于0.029毫克每毫升每分钟

而KM就等于斜率除以截距

就等于178.02÷34.139

等于5.215毫克每毫升

好了

计算完了和你算的一样吗

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第一章 课前须知

-第一节 基础生物化学实验学什么?

--《生物化学实验》学什么?

--《生物化学实验》学什么?

-第二节 本课程评分标准

--本课程评分标准

-第三节 如何更好的完成本课程的学习?

--不同需求的同学如何学习本课程?

--不同需求的同学如何学习本课程?

-第四节 生化实验室安全注意事项

--生化实验室安全注意事项

--生物化学实验室安全注意事项

-第五节 本课程教学团队介绍

--本课程团队介绍

--本课程教学团队介绍

-第六节 课前须知作业

--我对本课程的了解和疑惑

-第一章 课前须知 作业

第二章 生命科学三大必备仪器的使用

-第一节 移液器的设计原理和使用规范

--移液器的设计原理和使用规范

--移液器的设计原理和使用规范

-第二节 移液器的操作要点

--移液器的操作要点

--移液器的操作要点

--正向移液和反向移液

--正向移液和反向移液

--移液器的日常校准

--移液器的日常校准

--移液器的操作中易错点

--移液器操作中的易错点

--Eppendorf移液器操作手册

-第二章 移液器的使用 作业

--第二章 移液器的使用 作业

--请用思维导图或表格的形式列举移液器的使用要点

-第三节 分光光度计的设计原理和使用规范

--分光光度计的设计原理和使用规范

--分光光度计的设计原理和使用规范

-第四节 分光光度计的操作要点

--不同分光光度计的设计和操作差异

--不同分光光度计的设计和操作差异

--分光光度计的操作要点

--分光光度计的操作要点

-第五节 分光光度法测定待测物浓度

--分光光度法的原理

--分光光度法的原理

--分光光度法测定物质浓度的实验设计

--分光光度法测定物质浓度的实验设计

-第六节 荧光分光光度计的原理和使用规范

--荧光分光光度计的原理和使用规范

--荧光分光光度计的设计原理和使用规范

-第二章 分光光度计的使用 作业

--第二章 分光光度计的使用 作业

-第七节 离心机的设计原理和使用规范

--离心机的设计原理和使用规范

--离心机的设计原理和使用规范

--离心机的操作要点

--离心机的操作要点

-第二章 离心机的使用 作业

--第二章 离心机的使用 作业

-如何养成规范使用仪器设备的好习惯

第三章 物质的定量测定

-第一节 蛋白质的定量测定

--学习蛋白质定量测定的意义

--学习蛋白质定量测定的意义

--紫外法测定蛋白质浓度的实验原理

--紫外法测定蛋白质浓度的实验原理

--紫外法测定蛋白质的浓度的实验指导

--紫外法测定蛋白质浓度的操作方法

--紫外法测定蛋白质浓度的操作方法

--紫外法测定蛋白质浓度的实验数据计算

--紫外法测定蛋白质浓度的实验数据计算

--双缩脲法测定蛋白质浓度的实验原理和操作方法

--双缩脲法测定蛋白质的浓度的实验原理

--双缩脲法测定蛋白质浓度的实验指导

--双缩脲法测定蛋白质浓度的实验数据计算

--双缩脲法测定蛋白质浓度的实验数据计算

--Lowry法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--Lowry法测定蛋白质浓度的实验原理和操作方法

--Lowry法测定蛋白质的浓度的实验指导

--Bradford法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--Bradford法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--Bradford法测定蛋白质浓度的实验指导

--BCA法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--BCA法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--BCA法测定蛋白质浓度的实验指导

-第三节 其他物质的测定

--核黄素荧光光度定量测定法

--核黄素(VB2)荧光光度定量测定法

-第三章 物质的定量测定 作业

--第三章 物质的定量测定 作业

-你现在能独立设计一个生物分子的定量测定实验吗?

第四章 酶活力的测定

-第一节 酶活力测定的常用方法

--酶活力测定的常用方法

--酶活力测定的常用方法

-第二节 菠萝蛋白酶活力的测定

--菠萝蛋白酶活力测定的原理和操作(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶活力测定的原理和操作

--菠萝蛋白酶比活力的测定(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶比活力的测定(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶比活力测定的实验指导(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶活力的计算(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶活力的计算(Folin酚法)

-第三节 酶米氏常数的测定

--淀粉酶米氏常数的测定和计算

--淀粉酶米氏常数的测定和计算

--淀粉酶米氏常数测定的实验指导

--菠萝蛋白酶米氏常数测定的原理和操作(Folin酚法)

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--菠萝蛋白酶米氏常数测定的实验指导(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶米氏常数的计算(Folin酚法)

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-第四章 酶活力的测定 作业

--第四章 酶活力的测定 作业

-查阅一个你感兴趣的酶,想想怎么测?

第五章 物质的分离纯化

-第一节 蛋白质分离纯化的常见技术

--基因工程生产人血清白蛋白之路

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--蛋白质分离的一般原则和基本步骤

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--蛋白质的盐析提纯

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--盐析操作注意事项

--盐析操作注意事项

--蛋白质的有机溶剂和等电点沉淀

--蛋白质的有机溶剂和等电点沉淀

--离子交换层析

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--亲和层析

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--蛋白质的超速离心、透析和超滤

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--凝胶过滤层析的原理及凝胶颗粒选择

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--凝胶过滤层析的操作过程和注意事项

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--IMAC亲和层析

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--IMAC亲和层析技术的基本步骤

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--第五章 第一节 蛋白质的分离纯化 作业

-第二节 核酸的提取和检测

--核酸的制备原理及基本步骤

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--质粒DNA的提取制备

--质粒DNA的提取制备

--拟南芥叶片基因组DNA提取

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--紫外分光光度法测定核酸

--紫外分光光度法测定核酸

--第五章 第二节 核酸的提取 作业

-你想得到什么分子,如何纯化呢?

第六章 利用电泳对生物大分子进行检测

-第一节 核酸琼脂糖凝胶电泳

--核酸琼脂糖凝胶电泳的原理

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--核酸琼脂糖凝胶电泳的染色及结果分析

--核酸琼脂糖凝胶电泳的染色及结果分析

--核酸琼脂糖电泳-作业

-第二节 聚丙烯酰胺凝胶电泳

--SDS-PAGE电泳的原理

--SDS-PAGE电泳的原理

--SDS-PAGE电泳凝胶的染色

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--利用SDS-PAGE计算蛋白质的分子质量

--利用SDS-PAGE计算蛋白质的分子质量

--聚丙烯酰胺凝胶的聚合原理及相关特性

--聚丙烯酰胺凝胶的聚合原理及相关特性

--SDS-PAGE的原理和操作-作业

-除了电泳,还有什么用于生物大分子鉴定的方法?

第七章 期末考试

-《基础生物化学实验》期末考试

-请留下你对本课程的宝贵建议

菠萝蛋白酶米氏常数的计算(Folin酚法)笔记与讨论

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