当前课程知识点:基础生物化学实验 > 第四章 酶活力的测定 > 第二节 菠萝蛋白酶活力的测定 > 菠萝蛋白酶比活力的测定(Folin酚法)
我们在前一节中已经以菠萝蛋白酶为例,学习了酶活力测定的实验设计思路和操作注意事项,实际工作中,我们经常需要比较一种酶的不同样品或不同制剂之间的活力高低,这时候计算和比较比活力就更加方便。
根据国际酶学委员会的规定,比活力的定义是:每mg蛋白质所含的酶活力单位数(U/mg)。比活力代表了酶的纯度,对于同一种酶来说,比活力越大,代表酶的纯度越高。
有时候为了方便比较,比活力也用每克酶制剂含有多少酶活力单位(U/g)或者每ml酶制剂含有多少活力单位(U/ml)来表示,比活力是酶学研究和生产中常用的数据。
在酶蛋白的分离纯化中,用于表征纯化效率的“纯化倍数”就需要使用比活力来计算。
纯化倍数 = 每步纯化比活力/第一次比活力。
比活力的计算需要我们知道体系中蛋白质的量,所以,本实验采用Bradford法对体系中含有多少蛋白质进行测定。
然后将之前测定的酶活力单位含量与蛋白质含量一起,计算此菠萝蛋白酶溶液的比活力(U/mg)。关于计算的详细过程,同学们可以自己先计算一下,然后我们在下一节中一起讨论。
-第一节 基础生物化学实验学什么?
-第二节 本课程评分标准
--本课程评分标准
-第三节 如何更好的完成本课程的学习?
-第四节 生化实验室安全注意事项
-第五节 本课程教学团队介绍
--本课程团队介绍
-第六节 课前须知作业
-第一章 课前须知 作业
-第一节 移液器的设计原理和使用规范
-第二节 移液器的操作要点
--移液器的操作要点
--移液器的操作要点
--移液器的日常校准
--移液器的日常校准
-第二章 移液器的使用 作业
--第二章 移液器的使用 作业
-第三节 分光光度计的设计原理和使用规范
-第四节 分光光度计的操作要点
-第五节 分光光度法测定待测物浓度
--分光光度法的原理
--分光光度法的原理
-第六节 荧光分光光度计的原理和使用规范
-第二章 分光光度计的使用 作业
--第二章 分光光度计的使用 作业
-第七节 离心机的设计原理和使用规范
--离心机的操作要点
--离心机的操作要点
-第二章 离心机的使用 作业
--第二章 离心机的使用 作业
-第一节 蛋白质的定量测定
-第三节 其他物质的测定
-第三章 物质的定量测定 作业
--第三章 物质的定量测定 作业
-第一节 酶活力测定的常用方法
-第二节 菠萝蛋白酶活力的测定
-第三节 酶米氏常数的测定
-第四章 酶活力的测定 作业
--第四章 酶活力的测定 作业
-第一节 蛋白质分离纯化的常见技术
--蛋白质的盐析提纯
--蛋白质的盐析提纯
--盐析操作注意事项
--盐析操作注意事项
--离子交换层析
--离子交换层析
--亲和层析
--亲和层析
--IMAC亲和层析
--IMAC亲和层析
--第五章 第一节 蛋白质的分离纯化 作业
-第二节 核酸的提取和检测
--第五章 第二节 核酸的提取 作业
-第一节 核酸琼脂糖凝胶电泳
--核酸琼脂糖电泳-作业
-第二节 聚丙烯酰胺凝胶电泳
--SDS-PAGE的原理和操作-作业
-《基础生物化学实验》期末考试