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盐析操作注意事项在线视频

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盐析操作注意事项课程教案、知识点、字幕

同学们大家好

在之前的视频中你们

学习了盐析的原理

这个视频我将介绍盐析

的操作及注意事项

那么进行盐析操作时

加入的中性盐有哪些呢

常见的有硫酸铵硫酸钾

硫酸钠和氯化钠等等

在分离纯化过程中

硫酸铵使用最为普遍

原因在于硫酸铵作为中性盐

具有以下优点

溶解性高 温度系数小

如表格所示

即便是在0℃下都可达到每升溶液

能够溶解697g 固体硫酸铵

其次硫酸铵便宜

而且在条件适合时使用硫酸铵沉淀

蛋白还不会引起蛋白质变性

该方法能够有效维持蛋白质的活性

第三

硫酸铵是二价离子

同样浓度下比氯化钠离子强度更高

更容易导致蛋白质发生沉淀

因此在实验操作中是大家

普遍选择的中性盐

由于氯化钠相对比较便宜

常用于工业化生产

在使用硫酸铵时

通常有两种方法

加入饱和硫酸铵溶液或者

直接加入固体硫酸铵

如何配制饱和硫酸铵溶液呢

取固体硫酸铵800克

加去离子水1000 mL

不断搅拌条件下加热至50~60℃

保持30分钟

趁热过滤

滤液在室温中过夜有结晶

析出即达到100%饱和度

如果加入固体硫酸铵

可以直接查阅硫酸铵溶液饱和度计算表

简单计算固体硫酸铵的加入量

注意硫酸铵溶液饱和度计算

表有0℃和25℃两种

查阅时一定要看清楚温度

根据自己的实验条件

依据合适的

计算表进行计算

下面请计算室温下固体硫酸铵的加入量

如果现有100mL蛋白提取液

我想得到50%饱和度的硫酸铵溶液

需要加入多少固体硫酸铵呢

请看表格

第三行显示的是每100mL

溶液加入固体硫酸铵的量

第4行50%饱和度那列

的数字是31.3

表格中数字表示的是从不含

硫酸铵的溶液到加入硫酸铵

达到50%饱和度溶液时

需要加入

固体硫酸铵的克数

请注意

65%饱和度的数据是43克

下面

请计算

如果现有185mL蛋白粗提液

我想得到65%饱和度的硫酸铵溶液

需要加入多少固体硫酸铵呢

如公式所示

明白了这些计算后

让我们再看看下面的问题

如图所示

烧杯中有A、B、C三种蛋白质

假如A蛋白是目标蛋白

在20%饱和度硫酸铵

溶液中溶解性最小

而B和C分别在50%和80%饱和度

硫酸铵溶液中溶解性最小

如何获得A蛋白呢

是不是直接加硫酸铵到20%饱和度

离心弃去上清液

沉淀就是目标蛋白A

就是如此获得目标蛋白A

如果A蛋白不是目标蛋白

而B蛋白是

如何获得B蛋白呢

直接加硫酸铵到20%饱和度

离心弃去杂蛋白沉淀

在上清液中再加入硫酸铵

达到50%饱和度

离心沉淀中就有大量的目标蛋白B

那么加入多少克固体硫酸铵

才能将蛋白质溶液从20%饱和度

调至50%饱和度硫酸铵溶液

看计算表

横行饱和度20%

那行及第6行竖列饱和度50%

那列

交叉处数值是19g

表示每100mL20%饱和度硫酸铵

溶液中加入19g固体硫酸铵

即可达到50%饱和度

如何加入固体硫酸铵呢

在实际工作中加入硫酸铵

操作有以下注意事项

第一在搅拌条件下

少量

多次

缓慢加入

第二

硫酸加入完毕后

需要静置30分钟以上

离心分离 上清液和沉淀

为什么要如此操作呢

请你们考虑一下

在搅拌条件下缓慢加入

目的是避免快速加入

造成溶液局部盐浓度过高

致使某些高饱和度硫酸铵

溶液才能沉淀下来的

蛋白质发生沉淀

影响分离效果

硫酸铵加入完毕后

需要静置30分钟以上

离心分离 上清液和沉淀

该步骤操作的目的是让该饱和度

下沉淀的蛋白质充分沉淀

在现实生活中常用到盐析方法

例如

重组人生长素的分离

纯化及结构确定

这篇文献就涉及到盐析方法

如图所示

在前期纯化获得的低渗溶液中

加入固体硫酸铵溶液达到45%饱和度

搅拌均匀后放置在2~8℃条件下

静置盐析两小时

8000G离心

30分钟收集沉淀

经缓冲液溶解回收8000G

再离心30分钟收集上清液

该溶液极为盐析沉淀回收溶液

这步沉淀是为了获得目标蛋白

之前我们也谈到过盐析

去除杂蛋白的方式

这里不再举例

以上是本视频的主要内容

下面我将对本部分内容进行小结

在这个视频中

我首先讲解了硫酸铵作为

中性盐的优越性能

介绍了获得不同饱和度硫酸铵溶液

固体硫酸铵加入量的计算

最后指出了硫酸铵加入的注意事项

谢谢大家参与!

基础生物化学实验课程列表:

第一章 课前须知

-第一节 基础生物化学实验学什么?

--《生物化学实验》学什么?

--《生物化学实验》学什么?

-第二节 本课程评分标准

--本课程评分标准

-第三节 如何更好的完成本课程的学习?

--不同需求的同学如何学习本课程?

--不同需求的同学如何学习本课程?

-第四节 生化实验室安全注意事项

--生化实验室安全注意事项

--生物化学实验室安全注意事项

-第五节 本课程教学团队介绍

--本课程团队介绍

--本课程教学团队介绍

-第六节 课前须知作业

--我对本课程的了解和疑惑

-第一章 课前须知 作业

第二章 生命科学三大必备仪器的使用

-第一节 移液器的设计原理和使用规范

--移液器的设计原理和使用规范

--移液器的设计原理和使用规范

-第二节 移液器的操作要点

--移液器的操作要点

--移液器的操作要点

--正向移液和反向移液

--正向移液和反向移液

--移液器的日常校准

--移液器的日常校准

--移液器的操作中易错点

--移液器操作中的易错点

--Eppendorf移液器操作手册

-第二章 移液器的使用 作业

--第二章 移液器的使用 作业

--请用思维导图或表格的形式列举移液器的使用要点

-第三节 分光光度计的设计原理和使用规范

--分光光度计的设计原理和使用规范

--分光光度计的设计原理和使用规范

-第四节 分光光度计的操作要点

--不同分光光度计的设计和操作差异

--不同分光光度计的设计和操作差异

--分光光度计的操作要点

--分光光度计的操作要点

-第五节 分光光度法测定待测物浓度

--分光光度法的原理

--分光光度法的原理

--分光光度法测定物质浓度的实验设计

--分光光度法测定物质浓度的实验设计

-第六节 荧光分光光度计的原理和使用规范

--荧光分光光度计的原理和使用规范

--荧光分光光度计的设计原理和使用规范

-第二章 分光光度计的使用 作业

--第二章 分光光度计的使用 作业

-第七节 离心机的设计原理和使用规范

--离心机的设计原理和使用规范

--离心机的设计原理和使用规范

--离心机的操作要点

--离心机的操作要点

-第二章 离心机的使用 作业

--第二章 离心机的使用 作业

-如何养成规范使用仪器设备的好习惯

第三章 物质的定量测定

-第一节 蛋白质的定量测定

--学习蛋白质定量测定的意义

--学习蛋白质定量测定的意义

--紫外法测定蛋白质浓度的实验原理

--紫外法测定蛋白质浓度的实验原理

--紫外法测定蛋白质的浓度的实验指导

--紫外法测定蛋白质浓度的操作方法

--紫外法测定蛋白质浓度的操作方法

--紫外法测定蛋白质浓度的实验数据计算

--紫外法测定蛋白质浓度的实验数据计算

--双缩脲法测定蛋白质浓度的实验原理和操作方法

--双缩脲法测定蛋白质的浓度的实验原理

--双缩脲法测定蛋白质浓度的实验指导

--双缩脲法测定蛋白质浓度的实验数据计算

--双缩脲法测定蛋白质浓度的实验数据计算

--Lowry法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--Lowry法测定蛋白质浓度的实验原理和操作方法

--Lowry法测定蛋白质的浓度的实验指导

--Bradford法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--Bradford法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--Bradford法测定蛋白质浓度的实验指导

--BCA法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--BCA法测定蛋白质的浓度的实验原理和操作方法

--BCA法测定蛋白质浓度的实验指导

-第三节 其他物质的测定

--核黄素荧光光度定量测定法

--核黄素(VB2)荧光光度定量测定法

-第三章 物质的定量测定 作业

--第三章 物质的定量测定 作业

-你现在能独立设计一个生物分子的定量测定实验吗?

第四章 酶活力的测定

-第一节 酶活力测定的常用方法

--酶活力测定的常用方法

--酶活力测定的常用方法

-第二节 菠萝蛋白酶活力的测定

--菠萝蛋白酶活力测定的原理和操作(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶活力测定的原理和操作

--菠萝蛋白酶比活力的测定(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶比活力的测定(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶比活力测定的实验指导(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶活力的计算(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶活力的计算(Folin酚法)

-第三节 酶米氏常数的测定

--淀粉酶米氏常数的测定和计算

--淀粉酶米氏常数的测定和计算

--淀粉酶米氏常数测定的实验指导

--菠萝蛋白酶米氏常数测定的原理和操作(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶米氏常数测定的原理和操作(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶米氏常数测定的实验指导(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶米氏常数的计算(Folin酚法)

--菠萝蛋白酶米氏常数的计算(Folin酚法)

-第四章 酶活力的测定 作业

--第四章 酶活力的测定 作业

-查阅一个你感兴趣的酶,想想怎么测?

第五章 物质的分离纯化

-第一节 蛋白质分离纯化的常见技术

--基因工程生产人血清白蛋白之路

--基因工程生产人血清白蛋白之路

--蛋白质分离的一般原则和基本步骤

--蛋白质分离的一般原则和基本步骤

--蛋白质的盐析提纯

--蛋白质的盐析提纯

--盐析操作注意事项

--盐析操作注意事项

--蛋白质的有机溶剂和等电点沉淀

--蛋白质的有机溶剂和等电点沉淀

--离子交换层析

--离子交换层析

--亲和层析

--亲和层析

--蛋白质的超速离心、透析和超滤

--蛋白质的超速离心、透析和超滤

--凝胶过滤层析的原理及凝胶颗粒选择

--凝胶过滤层析的原理及凝胶颗粒选择

--凝胶过滤层析的操作过程和注意事项

--凝胶过滤层析的操作过程和注意事项

--IMAC亲和层析

--IMAC亲和层析

--IMAC亲和层析技术的基本步骤

--IMAC亲和层析技术的基本步骤

--第五章 第一节 蛋白质的分离纯化 作业

-第二节 核酸的提取和检测

--核酸的制备原理及基本步骤

--核酸的制备原理及基本步骤

--质粒DNA的提取制备

--质粒DNA的提取制备

--拟南芥叶片基因组DNA提取

--拟南芥叶片基因组DNA提取

--紫外分光光度法测定核酸

--紫外分光光度法测定核酸

--第五章 第二节 核酸的提取 作业

-你想得到什么分子,如何纯化呢?

第六章 利用电泳对生物大分子进行检测

-第一节 核酸琼脂糖凝胶电泳

--核酸琼脂糖凝胶电泳的原理

--核酸琼脂糖凝胶电泳的原理

--核酸琼脂糖凝胶电泳的染色及结果分析

--核酸琼脂糖凝胶电泳的染色及结果分析

--核酸琼脂糖电泳-作业

-第二节 聚丙烯酰胺凝胶电泳

--SDS-PAGE电泳的原理

--SDS-PAGE电泳的原理

--SDS-PAGE电泳凝胶的染色

--SDS-PAGE电泳凝胶的染色

--利用SDS-PAGE计算蛋白质的分子质量

--利用SDS-PAGE计算蛋白质的分子质量

--聚丙烯酰胺凝胶的聚合原理及相关特性

--聚丙烯酰胺凝胶的聚合原理及相关特性

--SDS-PAGE的原理和操作-作业

-除了电泳,还有什么用于生物大分子鉴定的方法?

第七章 期末考试

-《基础生物化学实验》期末考试

-请留下你对本课程的宝贵建议

盐析操作注意事项笔记与讨论

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